聚丙烯酰胺凝胶电冰是怎么回事

 很多客户都很了解聚丙烯酰胺的作用及特点，但是聚丙烯酰胺凝胶电泳有不少客户会疑惑什么是聚丙烯酰胺凝胶电泳，又有什么作用呢？聚丙烯酰胺简称PAM、结构式为[－CH2－CH(CONH2)]n－，分子量100～ 500万。聚丙烯酰胺主要有两种商品形式，一种是粉末状的，另一种是胶体，还有聚丙烯酰胺乳液(上海合成树脂研究所研制)。易溶于冷水，速度很慢，高分子量的聚丙烯酰胺当浓度超过10%以后．就会形成凝胶状结构。提高温度可以稍微促进溶解，但温度不得超过50℃，以防发生分子降解。难溶于有机溶剂。温度超过120 ℃时分解。中性。无毒。用作增稠剂、絮凝剂、减阻剂，具有凝胶、沉降、补强等作用。贮存于阴凉、通风、干燥的库房内，防潮、避光、防热．存放时间不宜过长。

        聚丙烯酰胺凝胶电泳;polyacrylamide gel electrophoresis;PAGE用聚丙烯酰胺为支持基质的电泳程序。一般说来，实现聚丙烯酰胺凝胶电泳有两种类型。(1)单向电泳：采用完整的蛋白质或用十二烷基磺酸钠(SDS)处理的蛋白质的单向泳动，在有凝胶的平板上平行分离(过去也有用在玻管中的圆筒形棒状凝胶进行电泳的，现已很少有人使用)。(2)双向电泳：首先用天然蛋白质进行分离，然后凝胶平板再用SDS处理，样品便在第二向得到分离。第一次分离了各种各样的蛋白质，因此第二向分离的是蛋白质亚基。主要优点是：(1)合成聚合物，故重复性良好；(2)分离能力好；(3)通过增减丙烯酰胺单体和交联剂(N,N′-亚甲基双丙烯酰胺)的浓度，可以调节凝胶的孔径大小；(4)操作简便、时间短；(5)化学性质稳定、机械性能好，柔软；(6)在酸性或碱性缓冲液中均可进行电泳，而且可加入两性电解质进行等电点电泳，可用含电解质表面活性剂(SDS)或非电解质表面活性剂(Np40、Tritonx-100等)的凝胶进行电泳，亦可使两者组合进行双向电泳等等，使用范围广泛，利用价值日益提高；(7)由于染色技术的进步，可以进行定量，也可检测出极微量的斑点(琼脂糖电泳)。

        SDS是阴离子去污剂，作为变性剂和助溶试剂，它能断裂分子内和分子间的氢键，使分子去折叠，破坏蛋白分子的二、三级结构。而强还原剂如巯基乙醇，二硫苏糖醇能使半胱氨酸残基间的二硫键断裂。在样品和凝胶中加入还原剂和SDS后，分子被解聚成多肽链，解聚后的氨基酸侧链和SDS结合成蛋白- SDS胶束，所带的负电荷大大超过了蛋白原有的电荷量，这样就消除了不同分子间的电荷差异和结构差异。SDS-PAGE一般采用的是不连续缓冲系统，与连续缓冲系统相比，能够有较高的分辨率。 浓缩胶的作用是有堆积作用，凝胶浓度较小，孔径较大，把较稀的样品加在浓缩胶上，经过大孔径凝胶的迁移作用而被浓缩至一个狭窄的区带。当样品液和浓缩胶选TRIS/HCL缓冲液，电极液选TRIS/甘氨酸。电泳开始后，HCL解离成氯离子，甘氨酸解离出少量的甘氨酸根离子。蛋白质带负电荷，因此一起向正极移动，其中氯离子最快，甘氨酸根离子最慢，蛋白居中。电泳开始时氯离子泳动率最大，超过蛋白，因此在后面形成低电导区，而电场强度与低电导区成反比，因而产生较高的电场强度，使蛋白和甘氨酸根离子迅速移动，形成以稳定的界面，使蛋白聚集在移动界面附近，浓缩成一中间层。 　　此鉴定方法中，蛋白质的迁移率主要取决于它的相对分子质量，而与所带电荷和分子形状无关。

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